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免疫沉淀概述

      科研中我们涉及到的免疫沉淀实验通常指:免疫共沉淀(Co-IP)、RIP、Chip等等,下面将几种实验简单概述一下。

      免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白间相互作用的经典方法,属于免疫沉淀技术的一类,常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。免疫共沉淀的设计理念是,假设一种已知蛋白是某个大的蛋白复合物的组成成员,那么利用这种蛋白的特异性抗体,就可能将整个蛋白复合物从溶液中“拉”下来(常说的“pull-down”),进而可以用于鉴定这个蛋白复合物中的其他未知成员。

      一般大致步骤为:抗体与细胞裂解液或蛋白表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白A/G(ProteinA/G)(或二抗)偶联的琼脂糖微珠(ProteinA/G Magnetic beads)孵育,通过离心得到微珠-蛋白A/G(或二抗)-抗体-目的蛋白复合物。复合物沉淀经离心洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,沸水浴5-10 min,在高温及还原剂的作用下,抗原与抗体解离,离心收集上清,上清中包括抗体(轻链和重链已断开)和靶标蛋白。该上清混合物经SDS-PAGE电泳分离和Western blotting显影,其后依据显影后的胶片上是否有目的蛋白条带,来判断免疫沉淀实验是否成功。


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