大鼠胃Cajal间质细胞分离培养及鉴定

【材料】

成年大鼠、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗、两性霉素、FBS、培养皿、15ml离心管、M199、PBS、D-Hanks、酶消化液（0.1%II型胶原酶、ATP、胰蛋白酶抑制、SCF（干细胞生长因子）、Ficoll 400；）

【方法】

1）处死大鼠，取胃窦组织，去除粘膜层和粘膜上皮D-Hanks清洗。

2）将胃肌条组织剪成1mm×1mm×1mm组织碎片,加入酶液消化60min。

3）消化液浑浊后终止消化，过200目细胞网筛，1000rpm，10min离心，去上清。沉淀重复离心2次。

4）加入Ficoll 400，梯度分离，纯化细胞。

4）细胞沉淀种明胶包被的培养皿中，48h换液。

【鉴定】

1）免疫荧光：

阳性：c-kit