小鼠结肠平滑肌细胞分离培养

【简介】

平滑肌（细胞）虽有如斧足类的闭壳肌和足系牵引肌等是由平行走向长纤维状细胞（平滑肌纤维）所构成，但多数的平滑肌则是由长纺锤形（脊椎动物的内脏肌长不到1毫米）的单核细胞构成；

【材料】

双抗PBS、镊子、剪刀、75%酒精、20%FBS的DMEM；

【方法】

1）取小鼠一只, 实验时断椎处死。在无菌条件下快速自肛门上2 cm 取结肠10 cm 左右,双抗PBS中反复灌肠冲洗,移入含300 U/ ml 青霉素、300 U/ ml链霉素的缓冲液中浸泡,肠段内外各15 min 。

2）体视显微镜下沿肠系膜对侧纵行切开肠段,仔细地刮除粘膜层,翻转至侧,小心地撕去肠系膜,再仔细地刮去浆膜层。

3）反复用镊子侧角刮肠段的内、外层,直至余下的组织层在体视显微镜下观察到呈透明的一层为止。

4）将组织层剪碎, 加入双抗PBS离心,弃上清。

5）加500ul的10%FBSD的DMEM 培养液重悬组织碎块。

6）组织移入培养瓶中,放入培养箱内2h干贴，组织贴壁后补齐培养液继续培养,以后每3～4 天换液1 次，5d左右可见细胞爬出扩增。

【培养】

20%FBS的DMEM

图为原代结肠平滑肌细胞培养

【鉴定】

1）免疫荧光：

阳性：肌动蛋白-α（α-SMA/α-actin）、结蛋白（Desmin）；