小鼠甲状腺细胞分离培养及鉴定

【简介】

甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体，属于内分泌器官，位于哺乳动物颈部甲状软

骨下方，气管两旁;其中，甲状腺上皮细胞 ( 也称为滤泡细胞或主要细胞 ) 在甲状腺细胞中是负责生产和分泌甲状腺激素，包括四碘甲状腺原氨酸 (T4) 和三碘甲腺原氨酸 (T3)，具有 调节动物体生长发育、基础代谢及繁殖活动的重要生理功能；

【材料】

一）器械灭菌：

手术器械： 2把眼科直剪，2把弯镊、2支左右1.5mL离心管、6cm或10cm Dish；

二）溶液准备：

1）DMEM/F12 （含有20%FBS）培养基，37度水浴温育；

2）双抗PBS、75%的酒精；

3）II型胶原酶、I型胶原酶、中性蛋白酶、胰酶

【方法】

1、取 6-8 周龄的雄性小鼠，处死小鼠，，75％的酒精,取出与气管相连的甲状腺组织，置于预冷无菌含双抗的PBS缓冲液中浸泡洗涤，并剥离甲状腺组织；

2、在冰上用解剖剪机械剪碎甲状腺组织，大小约1mm³左右的碎块；

3、将剪碎的组织加入预热的 4-5 倍体积的消化混合液，于 37℃震荡消化 30-40min，震荡频率为250-300次/min；所述消化混合液包括0.05％-0.1％ 胰酶、0.1％-0.2％I型胶原酶、0.05％-0.15％II型胶原酶和 1-2U/mL中性蛋白酶；

4、吹打使细胞分散，经 200 目筛网过滤后，加入至含 Ficoll的分离液中，2000rpm/min离心，取中间白色层，1500rpm/min离心5min，弃上清；

5、PBS清洗2次，细胞种盘;

【培养】

DMEM（20%FBS）或干细胞专用培养液

【鉴定】

1）免疫荧光：

阳性：Cytokeratin-18；