兔角膜上皮细胞的分离培养及鉴定

【简介】

角膜由角膜上皮细胞、前弹力膜、角膜基质、后弹力膜和角膜内皮细胞5层结构组成,其中,角膜上皮细胞和角膜内皮细胞为其主要成分,它们在维持角膜正常结构和功能中起着重要作用；角膜上皮细胞的体外培养,是现代角膜病基础学研究的重要方法之一,对研究角膜的生理、病理、免疫学以及分子生物学都有极大的意义；

【材料】

3-8周龄兔、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗、PBS、DMEM/F12、FBS、培养皿、上皮细胞专用培养液；

【方法】

1）处死，去除头部皮毛，取出眼球组织；

2）从眼球组织中分离出眼角膜组织；

3）眼角膜组织PBS清洗干净；

4）组织外壁贴盘，2h后加入上皮专用培养液，2-3d细胞爬出；

【培养】

上皮细胞专用培养液

【鉴定】

1)免疫荧光

阳性：Cytokeratin 18

阴性：vimentin