兔成骨细胞分离培养及鉴定

【简介】

成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌，并促进基质矿化形成骨组织；骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨；

【材料】

3-8周龄兔、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗PBS、DMEM/F12、FBS、培养皿、15ml离心管、胰蛋白酶；

【方法】

1）取手术切除的骨膜，放入盛有PBS缓冲液的培养皿中，去除附着于骨膜上的结缔组织，将骨膜剪碎成1～2 mm2大小的组织块；

2）加入0.1 % EDTA与0.25％胰蛋白酶混合消化液，置于37℃条件下消化20～30分钟，进行1000r/min离心1～2分钟，沉淀骨膜组织块，弃去上清液，用PBS缓冲液洗涤沉淀骨膜组织块2～3次，重复上述离心（1000r/min离心1～2分钟）过程，37℃条件下再用1mg/ml I型胶原酶消化骨膜组织块约90分钟，进行1000r/min离心5～10分钟以沉淀细胞，弃去消化液；

3）用培养液洗涤细胞沉淀1～2次，离心（1000r/min离心10分钟）收集细胞；

【培养】

软骨专用细胞培养液

【鉴定】

碱性磷酸酶染色 (AKP)