豚鼠耳神经节细胞分离培养及鉴定

【简介】

神经节细胞较大，直径可达30微米，形态可为圆形、卵圆形、梨形，类似中枢神经系者含有清晰的圆形或椭圆形核及明显的核仁，尼氏小体发育良好。

【材料】

成年豚鼠、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗、FBS、培养皿、15ml离心管、DMEM、PBS、D-Hanks、0.2% II型胶原酶、0.2% dispase II；

【方法】

1）处死豚鼠，取神经节，PBS清洗；

2）组织加入0.2% II型胶原酶和0.2% dispase II，37℃消化30min；

3）1000rpm/min离心5min，加入酶，从新消化20min，重复2次；

4）1000rpm/min离心5min后去除上清.重新加入无血清限制性培养基重悬细胞,轻轻吹打10次.静置2min后,将上面细胞悬液转移到另一离心管.余下组织块多次重复上述过程,直至组织块基本消散为止；

5）细胞沉淀接种于多聚赖氨酸包被的培养皿中，3天换一次液；

【培养】

神经元专用培养液（2%B-27+20ug/ml NGF+DMEM/F12）

【鉴定】

1）免疫荧光：

阳性：NF,C-FOS