兔主动脉平滑肌细胞的分离培养及鉴定

目的：

从兔主动脉中分离出原代平滑肌细胞进行培养、鉴定；

一、材料：

3-8周龄兔、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗PBS、DMEM、FBS、培养皿、15ml离心管;

二、方法：

1)空气栓塞致死，无菌条件下取出主动脉，PBS反复清洗;

2）洗干净后用小镊子剥除外膜纤维结缔组织，用眼科剪将血管纵行剪开，眼科弯镊刮除血管内膜和肌层，以去除内皮细胞和平滑肌细胞，剩余的为外膜;

3）浸泡于PBS中并冲洗干净，剪成约 1mm 的组织块 ，将移入培养瓶，摆布均匀，翻转培养瓶，使瓶底向上，组织块位于培养瓶上方，加人 4～5mL含 20％FBS的 DMEM培养液，旋松瓶口，放入 CO2 孵箱培养；

4）3～4h后轻轻翻转培养瓶，使组织块浸人培养液中，绝对静置培养3d，4～6d后换液，可见散在、梭形细胞从组织块边缘爬出，8～10d 出现致密细胞层 ，隔天换液 1次；

三、鉴定：

阳性：α-SMA Desmin

阴性：Vimentin