小鼠骨髓来源内皮祖细胞

小鼠骨髓来源内皮祖细胞EPCs的分离培养及鉴定

 

简介

EPCs是一群具有游走特性,能自我更新、增殖分化为内皮细胞的多能干细胞,具有迟发性高增殖潜能及定向归巢特性。它与血管新生、心血管组织工程内皮化等关系密切,在基础研究、肢体缺血性疾病及心血管疾病等领域有关EPC的研究非常活跃,从而为治疗缺血性疾病、血管组织工程及肿瘤治疗提供了新的思路和手段

材料

3-8周龄小鼠、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗PBSPercoll淋巴细胞分离液、M199FBS、培养皿、15ml离心管、10μg/ ml人纤连蛋白包被盖玻片

方法

1脱颈处死,75%酒精浸泡5min,将股骨、胫骨迅速从小鼠中剥离下来,置于平皿中PBS浸泡,去除表面肌肉,PBS清洗干净;

2骨头移入新皿剪开两端,培液冲洗骨腔,吹打混匀,1000R/5min,弃上清,培液重悬;

3悬液缓慢加入预先装有等量体积Percoll1.083g/ml)离心管中2500R/30min(也有2300R/20min2000R/20min);

4收集离心后中间云雾状白膜层单个核细胞,培液洗涤两次,1000R/5-8min,弃上清;

510%FBS的专用培养液重悬,37°培养,24h后将含有未贴壁细胞的上清液转入新皿培养,2-3d首换液,之后每3d换液一次(注:24h取上清重新贴壁培养和不取上清一直培养后的细胞做鉴定都是EPC细胞);

【培养】

内皮专用培养液:10%FBSM19950ug/ml ECGSb-FGF20ng/ ml)、VEGF10-20ng/ml)、肝素钠10ug/ml





 


 

 

【鉴定】

1免疫荧光阳性:

造血干/祖细胞标志(CD133CD34)、血管内皮生长因子受体2VEGFR-2)、血管性血友病因子(vWF);

 


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