豚鼠食管上皮细胞分离培养及鉴定
【简介】
【材料】
成年豚鼠、手术剪、手术镊、75%酒精、双抗、FBS、培养皿、15ml离心管、DMEM、PBS、D-Hanks、胰酶;
【方法】
1)处死豚鼠,取食管组织,去除肌肉层,PBS清洗;
2),将上皮层组织剪成1mm×1mm×1mm组织碎片,加入0.1%I型胶原酶消化2-4h;
3)消化液浑浊后终止消化,过200目细胞网筛,1000rpm,5min离心,去上清,沉淀重复离心2次;
4)细胞沉淀种明胶包被的培养皿中,隔天换液;
【培养】
上皮细胞专用培养液
【鉴定】
1)免疫荧光:
阳性:CK18